无菌检查选择14天的原因
《中国药典》2000版附录无菌检查法规定无菌检查需气菌、厌气菌培养基管置30～50℃、真菌培养基管置20～25℃培养7日。《中国药典》2005版附录无菌检查法之后才开始延长至14天,因为大多数的细菌经过7天的培养都可以生长出来,这个对于本身允许少量菌落存在的非无菌药物已经足够了,但是对于要求严格无菌的药物,还要考虑到可能有极少数的细菌或者真菌,以及霉菌孢子生长速度比较慢,在7天时还未生长,所以要延长培养时间,以同样条件或者变换为霉菌培养的温湿度条件,再培养7天,以便给可能存在的污染菌一个足够的生长时间。的确有些菌在培养7天时观察不到长菌现象,但在14天培养后才发现了菌落,如结核杆菌,与其它常见的细菌比较，结核杆菌的生长代谢缓慢，并且在自然环境不利的情况下，结核杆菌具有很强的生存能力：常见的细菌一般10-30分种就能繁殖一代，而结核杆菌则需要12-24小时才能繁殖—代，由此可见结核杆菌的生长代谢比溃凶的细菌缓慢的多。它属于放线菌目分支杆菌科分支杆菌属，为专性需氧菌，营养要求高，在含有蛋黄、马铃薯、甘油和天门冬素等的固体培养基上才能生长。最适ph 6.5～6.8 ，最适温度为37℃，生长缓慢，接种后培养3～4周才出现肉眼可见的菌落；抗结核治疗后菌活力衰退，培养时需6--8周甚至20周后才出现菌落。
另外布鲁氏菌为胞内寄生菌，专性需氧，营养要求高，多数菌株培养时需要多种氨基酸、硫胺素、烟酸和生物素等，可在普通培养基中加入血清或肝渗液进行培养。初次分离需5%-10%的CO2，生长缓慢，培养2-3天出现菌落，4-5天后菌落直径可达2-3mm，菌落无色、半透明、表面光滑、无溶血，革兰染色为革兰阴性球杆菌，革兰染色时碱性复红着色弱，可延长染色时间至3分钟，镜下菌体较小，呈细沙状，偶见集聚成小团。触酶阳性，氧化酶阳性，脲酶快速阳性。有文献报道使用全自动血培养系统阳性率40-70%，平均培养时间5.7d（3-12d）[1]，并且生长曲线平缓。布鲁菌在自然环境中抵抗力很强，在干燥土壤中可生存数月，在皮毛中、乳及乳制品、冻肉中时间生存较长，对常用的物理消毒方法和化学消毒剂敏感，加热60℃或阳光下暴晒10～20min可杀死该菌，5％的石灰水、2％的来苏儿、0.2％的漂白粉均可以在数分钟内将该菌杀死。说明培养周期的延长对于无菌药物中的菌检还是很有必要的。
培养及观察：《中国药典》2015版四部通则1101 无菌检查法规定接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置30〜35℃培养，一份置20〜25℃培养。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊。《中国药典》2020版四部通则1101 无菌检查法规定接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养不少于14天；接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置30〜35℃培养，一份置20〜25℃培养。培养期间应定期观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，再培养不少于4天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊。
注：文章参考[1]贾斌,张峰波,等.血液检出布鲁氏菌阳性患者的实验室及临床特点分析[J].新疆医科大学学报,2017,40（2）：136-140.
；文章参考来源百度百科；《中国药典》2015版附录无菌检查法；《中国药典》2020版附录无菌检查法。图片来源网络和实验室。