在微生物检验工作中,菌落总数测定是用于检验样品被污染程度的一项基本指标。在实验过程中有时候因为被检验样品中含有沉渣（ 药品药渣、食品中的碎屑、化妆品中的颗粒等），其形态类似细菌或覆盖菌落给菌落计数工作造成一定的困难。为了防止细菌的蔓延生长和便于计数，有时可以加入适量的TTC进行染色从而方便菌落计数，提高菌落计数的准确性。TTC 化学名为2.3.5-氯化三苯基四氮唑，别名氯化三苯四氮唑，在微生物检验中起染色作用，其原理是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的还原产物，使菌落变红色，便于菌落计数。

     《化妆品安全技术规范》（2015 年版）第五章“微生物检验方法菌落总数”检验方法中介绍，为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL 卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基中加入0.5%氯化三苯四氮唑(TTC) 溶液1 mL，即每100mL培养基含TTC为5.0mg，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒物颜色无变化。

      而在药品微生物检查工作中，供试液常含有不溶性原料、辅料，当培养基注皿后亦可能产生沉淀物，经过培养后易形成数量很多的有形物，难与菌落相区别。或是对于某些软膏等非水溶性供试品，培养后生长的菌落与样品本底颜色接近，多为乳白色，不易辨认和点计。为了有利于菌落计数，可用含TTC的培养基注皿，经培养后生长的菌落为红色，易于区分细菌菌落和其他有形物。TTC的用量应以不抑制微生物生长为宜，一般是1%TTC加到培养基后的最终浓度为0.001%，即每100mL培养基含TTC为1.0mg。

      化妆品检验TTC添加量是药品的5倍，两者相差甚大，那TTC的浓度应为多少才是适宜量呢？从文章《不同浓度TTC在微生物检测培养基中的应用》中实验结果显示，每100mL培养基含TTC浓度在0.5 mg 及以下时菌落不显红色，TTC已不能起染色作用，失去了其使用价值。但培养基中加入过高浓度的TTC，会使样品中微生物生长受到抑制，甚至一定浓度的TTC会导致某些菌落种类不生长的情况，从而影响微生物计数结果的真实性，对实验的准确性造成误判。实验证明加高浓度TTC对革兰氏阳性菌表现显著抑制，对革兰氏阴性菌表现无抑制，且TTC浓度越高,抑制作用越明显。加入培养基TTC适宜度为1.0～2.5 mg/100mL，不应达5.0 mg/100mL及以上浓度。《化妆品安全技术规范》2015年版“菌落总数”测定中每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基中加入0.5%TTC溶液1mL，达到5.0 mg/100mL的浓度，其适宜性有待考究。

注：文章参考《不同浓度TTC在微生物检测培养基中的应用》（作者：李学兴、石琳、梁伟），《化妆品安全技术规范》（2015年版），《中国药品检验标准操作规范》（2010年版）；图片来源于本实验室。